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猪IFN-γ基因的融合表达及其表达产物的生物学特性

文献类型： 中文期刊

作者： 窦永喜;翟军军;李健;潘晓梅;景志忠;才学鹏

作者机构：

关键词： 猪;IFN-γ基因;融合表达;蛋白纯化;生物学活性

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2008 年 38 卷 06 期

页码： 525-530

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 依照猪IFN-γ(pIFN-γ)成熟蛋白基因序列设计引物,将已扩增的pIFN-γ基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了GST-pIFN-γ融合表达载体,该载体转化宿主菌BL21后用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了筛选和优化,筛选出最佳诱导表达条件后大量诱导表达,可溶性的表达产物经GST琼脂糖凝胶亲和纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化。经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实得到了高纯度的融合蛋白,该蛋白的分子质量为42ku。选择FMDV和PRV两种不同的病毒(RNA病毒和DNA病毒)进行GST-pIFN-γ抗病毒活性测定。结果表明,GST-pIFN-γ融合蛋白可有效抑制这两种病毒引起的细胞病变,其对FMDV的抑制作用远远大于对PRV的抑制。对GST-pIFN-γ融合蛋白的稳定性及机体毒副作用的研究表明,该pIFN-γ的稳定性有较大提高,而毒副作用大大降低。

分类号： S852.5

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