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新霉素磷酸转移酶基因npt Ⅱ的原核表达、蛋白纯化及其活性鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 王玲 ; 刘连盟 ; 傅强 ; 黄世文 *

作者机构：

关键词： 新霉素磷酸转移酶基因;原核表达;包涵体;可溶性蛋白;纯化

期刊名称：中国水稻科学

ISSN： 1001-7216

年卷期： 2011 年 25 卷 03 期

页码： 326-330

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 通过PCR方法从pCAMBIA1305载体上克隆了新霉素磷酸转移酶基因nptⅡ的全编码序列,并插入到原核表达载体pET30a(+)中,构建了重组质粒pET30a-nptⅡ。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,获得了相对分子量为35kD的表达蛋白,约占全菌总蛋白的45%。表达蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。用5mmol/L二硫苏糖醇和1%十二烷基肌氨酸钠变性溶解包涵体,经透析后复性获得了可溶性重组蛋白。将可溶的表达蛋白用Ni 2+-NTA亲和层析纯化,获得纯化的NPTⅡ蛋白,电泳谱带扫描分析表明蛋白纯度达95%以上。体外活性检测显示,NPTⅡ蛋白具有良好的生物活性,在浓度30μg/mL以上时可使卡拉霉素失去抑菌活性。

分类号： S188

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