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犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术

文献类型： 中文期刊

作者： 李健;熊炜;陈沁;王权;王巧全;张建武;胡永强;李树清

作者机构：

关键词： 冠状病毒;克隆;基因芯片;杂交

期刊名称：中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2008 年 28 卷 11 期

页码： 1284-1287+1291

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。

分类号： S852.65`S854.43

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