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苹果坏死花叶病毒CP基因原核表达及其抗血清制备

文献类型： 中文期刊

作者： 邢飞;王红清;李世访

作者机构：

关键词： 苹果坏死花叶病毒;外壳蛋白基因;原核表达;抗血清;酶联免疫吸附分析方法

期刊名称：西南大学学报(自然科学版)

ISSN： 1673-9868

年卷期： 2024 年 46 卷

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度）

摘要： 苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus, ApNMV)是近年新发现的病原物，并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒，进行ApNMV外壳蛋白(coat protein, CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清，以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规检测方法尤为必要.通过设计特异性引物，以RT-PCR方法成功获得ApNMV CP基因序列，插入到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒，转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG进行重组蛋白(含His-tag)诱导表达. SDS-PAGE和Western blot分析结果表明，CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达，用Ni Sepharose 6 Fast Flow进行蛋白纯化，回收共得到重组蛋白2.4 mg.在屏障环境下免疫2只SPF级新西兰兔，制备出多克隆抗血清，稀释400倍后仍能与ApNMV阳性苹果叶片样品发生免疫反应.由此证明，本研究建立的ApNMV间接ELISA检测方法具有较好的灵敏性，检测效率高，能够用于田间大量样品ApNMV的诊断.

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