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苏云金芽胞杆菌可视化快速表达载体的构建与特性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 张静安;胡孝龙;曹蓓蓓;廖敏;束长龙;张杰;王奎;操海群

作者机构：

关键词： 苏云金芽胞杆菌;杀虫基因;cry1Ac启动子;大肠杆菌;表达载体

期刊名称：生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 【目的】构建可以快速高效表达苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）杀虫基因的表达载体，提高Bt杀虫基因发掘及功能研究效率。【方法】以pUC18载体为基础，构建一个以cry1Ac基因启动子p1Ac指导、融合绿色荧光蛋白GFP的可视化快速表达载体p1Ac-GFP，并从生物活性、碱溶性、抗胰蛋白酶稳定性、培养条件等方面对其进行分析。【结果】p1Ac-GFP在大肠杆菌中指导表达的Cry1Ac蛋白与Bt来源的蛋白在杀虫活性方面无明显差异。同时，p1Ac-GFP表达的Cry1Ac蛋白能够溶解于50 mmol/L Na2CO3溶液中，可溶性组分可被胰蛋白酶消化为60 kD大小的核心活性片段。此外，p1Ac-GFP大肠杆菌宿主菌株可以发出绿色荧光，培养菌液荧光强度与所表达的Bt蛋白浓度呈较好的线性关系。培养条件优化结果显示，37℃、培养液与装瓶体积比为5/5、48 h的培养时间最适合p1Ac-GFP表达Bt Cry1Ac蛋白。【结论】p1Ac-GFP表达Bt蛋白时可以直接使用菌液荧光强度作为生物活性测定的浓度指示依据，有助于Bt基因杀虫活性功能的快速批量筛选。

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