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人参根系酵母文库构建及PgD14与Pgpht2-1的互作蛋白筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 梁浩;孙海;邵财;吕柏辰;曹炜玉;龙泓桔;张亚玉

作者机构：

关键词： 人参;酵母单杂交;酵母双杂交;互作蛋白

期刊名称：中国中药杂志

ISSN： 1001-5302

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 为构建高质量的人参cDNA文库，并通过酵母单杂交文库筛选结合人参PgD14基因启动子的转录因子，通过酵母双杂交文库筛选与人参Pgpht2-1基因编码蛋白发生互作的蛋白。该研究以人参的根部组织为材料，利用Gateway技术构建人参酵母单杂交文库，利用特异性核酸酶（duplex-specific nuclease，DSN） 均一化技术构建人参酵母双杂交文库，并以pAbAi-PgD14-Pro961为诱饵载体从酵母单杂交文库中筛选了可能结合PgD14基因启动子的候选转录因子，以pGBKT7-Pgpht2-1为诱饵载体从酵母双杂交文库中筛选了可能与Pgpht2-1基因编码蛋白发生互作的候选蛋白。通过文库鉴定，检测到酵母单杂交文库的库容为1.20×107，重组率为100%，插入片段平均长度大于1 000 bp；酵母双杂交文库的库容为1.832×108，重组率为100%，插入片段平均长度在1 000 bp左右。分别将pAbAi-PgD14-Pro961和pGBKT7-Pgpht2-1重组载体转化Y1HGold和AH109菌种，通过酵母单杂交和双杂交进行互作蛋白的筛选，最终筛选到54个可能结合到人参PgD14基因启动子的转录因子，以及42个可能与人参Pgpht2-1基因编码蛋白发生互作的蛋白。该研究同时构建了人参酵母单杂交与酵母双杂交的cDNA文库，为后续人参PgD14、Pgpht2-1等基因功能的研究奠定了基础。

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