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β-1,3-1,4葡聚糖酶基因双拷贝工程菌株的构建与发酵研究

文献类型： 中文期刊

作者： 裴红蕾;陈轶群;吕俊楠;杨雯涵;李志民;曹云鹤

作者机构：

关键词： β-1,3-1,4葡聚糖酶;双拷贝;毕赤酵母;发酵

期刊名称：中国畜牧杂志

ISSN： 0258-7033

年卷期： 2013 年 49 卷 03 期

页码： 64-68

收录情况： 北大核心

摘要： 本试验旨在研究β-1,3-1,4葡聚糖酶双拷贝基因毕赤酵母工程菌株的构建及发酵。首先,通过对质粒pGAP-glu-opt进行PCR扩增获得密码子优化的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因glu-opt,用EcoR I和Not I双酶切后与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,获得重组质粒p9K-glu-opt。该重组质粒经Sac I线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,利用不含组氨酸的MDS平板和摇瓶培养,筛选重组菌株,命名为GS115/9K-glu-opt。制备GS115/9K-glu-opt感受态细胞,再用线性化的重组质粒pPIC-glu-opt二次转化,在含有抗生素Zeocin的YPDS平板上筛选glu-opt基因双拷贝重组菌株GS115/2xglu-opt。双拷贝重组菌在10 L发酵罐中进行高密度发酵培养及甲醇诱导表达,β-1,3-1,4葡聚糖酶最高酶活达到21 600 U/mL,约为单拷贝工程菌株X33/pPIC-glu-opt发酵活力的1.44倍;蛋白表达量达8.4 g/L,约为X33/pPIC-glu-opt的1.68倍。

分类号： Q78`S816

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