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利用昆虫细胞表达猪RANKL蛋白及其生物学活性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 周亚伟;蒋华正;杨宁;付钰广;李宝玉;杨彬;刘光亮

作者机构：

关键词： RANKL;M细胞;杆状病毒表达系统

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 将猪RANKL基因克隆至杆状病毒供体质粒pFastBacHTA中，经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组供体载体pFastBacHTA-RANKL，将其转化至含有杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞，构建杆状病毒表达载体，获得重组转座子Bacmid-RANKL，在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞，获得含RANKL基因的重组杆状病毒。经SDS-PAGE分析、Western-blot分析以及IFA试验，证明RANKL基因在sf9细胞中成功表达。利用表达的RANKL蛋白刺激IPEC-J2细胞，采用qPCR方法检测处理后细胞中M细胞相关标志基因的表达。结果显示，与阴性对照组相比，猪RANKL处理后的细胞中M细胞特异性的标记基因CK-18、Marcksl1、Sgene1、Spib、CCL20、UBD、NCF4、TRAF6表达量都显著上调。这表明本研究表达的猪RANKL具有良好的生物学活性，可成功诱导IPEC-J2细胞向M细胞分化。本研究结果为后续进一步研究猪肠道M细胞的分化，及研制增强猪肠道黏膜免疫应答的M细胞靶向疫苗打下了良好的物质基础。

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