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猪肺炎支原体Mhp271蛋白的多克隆抗体制备及在抗猪肺炎支原体感染中的应用

文献类型： 中文期刊

作者： 赵环君;刘桐;武琪;魏渝坤;辛九庆;潘巧

作者机构：

关键词： 猪肺炎支原体;Mhp271蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： EI（2025版） ; ; 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 为了制备猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae， Mhp)膜蛋白Mhp271的多克隆抗体(polyclonal antibody， pAb)并系统评价其免疫学特性及潜在应用价值。首先通过PCR技术扩增获得mhp271基因片段(3 156 bp)，将其克隆至原核表达载体pMAL-c5x中构建重组表达质粒pMAL-c5x-mhp271。经PCR鉴定和DNA测序验证正确后，将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，通过IPTG诱导表达重组Mhp271蛋白(rMhp271)。Western blotting分析结果显示，rMhp271在160 kDa处呈现特异性条带，表明该重组蛋白成功表达。将纯化的rMhp271蛋白乳化后经3次免疫Balb/c小鼠，并在第3次免疫1周后采血，分离血清获得抗Mhp271蛋白pAb。为评价该pAb的反应原性，建立Mhp体外感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages， PAMs)模型，感染12 h后分别采用Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay， IFA)进行检测。Western blotting结果显示，在Mhp感染的PAMs细胞裂解物中可见118 kDa特异性条带，而未感染对照组未检测到相应条带；IFA检测结果显示，Mhp感染组细胞中出现明显的绿色荧光信号，未感染对照组则无荧光信号。进一步通过体外封闭试验评估抗Mhp271蛋白pAb的抗Mhp感染潜力。将Mhp分别与100倍稀释的抗Mhp271蛋白pAb(实验组)或阴性血清(对照组)预孵育30 min后，接种至PAMs细胞培养12 h，TaqMan实时荧光定量PCR检测结果显示，实验组Mhp载量较对照组显著降低；IFA检测发现实验组荧光信号强度明显减弱。综上所述，本研究制备的抗Mhp271蛋白pAb具有良好的反应原性和抗感染活性，可用于Western blotting、IFA等免疫学检测方法。

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