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绵羊肺炎支原体基因组DNA表达文库的构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 陈诚;乔军;孟庆玲;刘田莉;胡政香;马玉;才学鹏;陈创夫

作者机构：

关键词： MO;基因组表达文库;构建;鉴定

期刊名称：西北农业学报

ISSN： 1004-1389

年卷期： 2016 年 25 卷 05 期

页码： 646-651

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)免疫原性相关基因,提取MO基因组DNA,利用限制性内切酶Sau3AⅠ对基因组DNA进行酶切,回收500~3 000bp的基因组DNA片段,用T4DNA连接酶将其与经BamHⅠ酶切并去磷酸化处理的pET28a/b/c载体连接,然后转化至DH5α感受态细胞,通过菌液PCR对插入到载体中的片段大小及插入率进行鉴定。从转化的平板上提取质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,构建MO基因组表达文库。随机挑选单菌落,用pET28a/b/c通用引物进行PCR鉴定,结果显示插入片段大小为300~2 000bp,插入率为90%,表明成功构建了MO基因组表达文库,该文库的构建为进一步筛选MO相关的免疫性基因及潜在候选疫苗靶点奠定前期基础。

分类号： S852.62

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