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猪内源性逆转录病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 王建;郭洁真;王子涵;孙彤;陈鸿军;孙竹筠;陈丹清

作者机构：

关键词： 猪内源性逆转录病毒;pol;TaqMan探针;实时荧光定量RT-PCR

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究成功构建了一种高特异性、高灵敏性的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR技术，用于检测猪内源性逆转录病毒（PERV）。基于GenBank中PERV的pol基因序列，本研究设计并筛选了特异性引物和探针，绘制标准曲线，同时对该方法进行了灵敏度、特异性、重复性及临床检测适用性等关键指标进行了评估。结果显示：质粒标准品Ct值与浓度间呈现优良的线性相关性(R2=0.9995)；基于重组质粒pCDNA3.1-pol体外转录RNA的灵敏度试验显示，灵敏度达10 copies，比普通RT-PCR方法提高了两个数量级，表明该方法具有良好的灵敏度；同时，该方法与PRRSV、CSFV及PEDV等病原体核酸均未出现非特异性扩增，证明其具有良好的特异性；变异系数（CV）小于3%，表明该方法具有良好的重复性。本研究建立了一种针对PERV的灵敏性强、特异性高的检测方法，能对器官移植前供体的PERV诊断提供参考价值。

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