数字农科院2.0

猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 杨小曼;时洪艳;张燎原;张鑫;张记宇;刘大凯;冯廷帅;曾苗苗;陈建飞;石达;冯力

作者机构：

关键词： 猪急性腹泻综合征冠状病毒;S1蛋白;间接ELISA方法;抗体检测

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 6 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒pCAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTM Excel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强；该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至13200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性；对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性；利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品；IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。

分类号：

  • 相关文献

[1]基于山羊痘病毒P32蛋白ELISA检测方法的建立. 吴锦艳,田宏,陈妍,尚佑军,宋江伟,刘湘涛. 2014

[2]基于重构NDRV σC蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立. 武华,林伟东,孟利佳,阴雅洁,乔思娜,倪维玲,侯绍华,徐倩倩,董世山. 2022

[3]猪急性腹泻综合征冠状病毒膜蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备. 段月月,孔祥雨,袁聪,索学鹏,王琦,郑海学,曹丽艳. 2022

[4]猪冠状病毒四重荧光定量PCR检测方法建立. 俞赵荣,孙彤,金雪明,孙竹筠,苏苌,刘静宜,刘英楠,陈鸿军. 2023

[5]猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其抗体序列的分析. 曹丽艳,孔祥雨,李想通,索学鹏,段月月,袁聪,施磊,张宇,马国祥,郑海学,王琦. 2023

[6]猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白新型线性B细胞表位的鉴定. 曹丽艳,孔祥雨,袁聪,段月月,马国祥,施磊,张宇,万颖,李想通,王娅婷,杜煜,郑海学,王琦. 2025

[7]猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用. 刘大凯,韩郁茹,张记宇,张燎原,冯廷帅,杨小曼,曾苗苗,时洪艳,秦毅斌,石达,冯力. 2024

[8]猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究. 苗苗,刘大凯,张记宇,张燎原,冯廷帅,杨小曼,时洪艳,张鑫,陈建飞,石达,冯力. 2024

[9]猪急性腹泻综合征冠状病毒RT-CPA-LFS检测方法的建立与初步应用. 胡泽东,张记宇,丛广义,季朝阳,石达,冯力. 2025

[10]鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LT95Ⅰ株病毒攻击的免疫保护. 石星明,王玫,王云峰,杨桂花,孙鹏,李继松,曾伟伟,刘胜旺. 2009

[11]鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95Ⅰ株病毒攻击的免疫保护. 石星明,王玫,王云峰,杨桂花,孙鹏,李继松,曾伟伟,刘胜旺. 2009

[12]表达鸡传染性支气管炎病毒JS/95/03株S1蛋白的重组杆状病毒构建. 戴亚斌,陈德胜,丁铲,潘杰彦,刘兴友,芦银华,刘梅,陈溥言,蔡宝祥. 2003

[13]共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒部分生物学特性测定. 王云峰,石星明,王玫,刘胜旺,童光志,崔红玉,木古丽,徐灵龙,何来,贺笋,葛俊伟,李一经. 2007

[14]猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA方法的建立. 刘烨,张家林,王潇博,石达,时洪艳,陈建飞,张鑫,冯力. 2019

[15]猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定. 杨德强,李慧春,陈鹏飞,王康,李先斌,张文超,虞凌雪,姜一峰,高飞,黄勤峰,于海,童光志,周艳君. 2017

[16]鸡传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95I株病毒攻击的免疫保护. 王云峰,石星明,王玫,刘胜旺,童光志,何来,贺笋,崔红玉,李一经. 2008

[17]鸡传染性支气管重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LHB株病毒攻击的免疫保护. 石星明,王云峰,王玫,刘胜旺,童光志,徐灵龙,贺笋. 2006

[18]重组杆状病毒表达的2株传染性支气管炎病毒S1蛋白的免疫原性评价. 戴亚斌,丁铲,刘梅,陈德胜,潘杰彦,芦银华,陈溥言,蔡宝祥. 2003

[19]表达鸡传染性支气管炎病毒SD/97/01株S1蛋白的重组杆状病毒的构建. 戴亚斌,陈德胜,丁铲,潘杰彦,刘兴友,芦银华,刘梅,陈溥言,蔡宝祥. 2002

[20]水貂阿留申病毒抗体胶体金检测方法的开发和应用. 王振军,罗国良,易立,郭利,冯二凯,程世鹏,程悦宁. 2019

作者其他论文 更多>>