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猪带绦虫TS018基因真核表达载体的构建及其表达

文献类型： 中文期刊

作者： 袁改玲;才学鹏;景志忠;郑亚东;骆学农;郭爱疆

作者机构：

关键词： 猪带绦虫;TSO18基因;毕赤酵母;诱导表达

期刊名称：中国兽医科技

ISSN： 1000-6419

年卷期： 2005 年 035 卷 007 期

页码： 529-532

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR从重组克隆载体pGEM―TSO18中扩增出猪带绦虫六钩蚴TSO18基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9k相连接,构建重组表达载体pPIC9k―TSO18,转化大肠埃希氏菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确.制备重组质粒pPIC9k―TSO18,用SalⅠ线性化,并电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合.采用G418抗性梯度法筛选得到高拷贝重组菌株,以甲醇进行诱导表达,SDS―PAGE和Western-blotting分析结果表明,诱导表达的培养上清中表达出具有反应活性的16ku重组蛋白,目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的80％以上,诱导72h目的蛋白表达量为0.5mg/mL.

分类号： S852.734%Q782

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