文献类型： 中文期刊
作者： 王婉洁;陈南珠;邹惠影;周心仪;郝海生;庞云渭;朱化彬;赵学明;余大为;杜卫华
作者机构：
关键词： ASH1L甲基转移酶;牛卵丘细胞;过表达;细胞增殖;细胞凋亡;H3K36me1/2
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2023 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 旨在探究缺失的、小的、同源异形1（absent，small，orhomeotic1-like，ASH1L）过表达对牛卵丘细胞（cumulus cells，CCs）增殖和凋亡的影响。本研究将牛ASH1LSET结构域的DNA序列克隆到pcDNA3.1上，构建牛ASH1L过表达载体；以导入该载体的牛CCs为过表达组（OE-ASH1L），野生型牛CCs为对照组（Control），采用免疫荧光染色检测两组细胞中ASH1L表达水平和H3K36me1/2/3甲基化水平；通过流式细胞术分析ASH1L过表达细胞的凋亡和增殖情况；采用荧光定量PCR检测两组细胞中凋亡、增殖相关基因的mRNA表达水平。以牛CCscDNA为模板，PCR扩增获得长2487 bp的牛ASH1LSET结构域DNA片段，与pcDNA3.1载体连接；经NheI/Not I双酶切和测序鉴定，成功构建过表达载体pcDNA3.1+ASH1L。过表达载体转染牛CCs后，细胞中ASH1LmRNA及其蛋白表达水平、H3K36me1/2甲基化水平均显著升高（P＜0.05）。另外，ASH1L过表达显著提高活细胞率（91.85±1.25）%vs. （87.39±1.71）%，降低细胞凋亡率（12.51±1.72）%vs. （8.08±1.21）%，并显著下调凋亡基因BAX和CASPASE-3mRNA表达水平（P＜0.05），上调抗凋亡基因 BCL-2 mRNA表达水平（P＜0.01）。ASH1L过表达24 h、36 h时，细胞增殖率、增殖相关基因PCNA、CCND2表达水平显著升高（P＜0.05）。可见，ASH1L过表达抑制了牛CCs凋亡，诱导了细胞增殖及H3K36me1/2甲基化水平的升高，为进一步研究ASH1L对CCs生长和卵泡发育的调控提供技术和理论基础。
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