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羊布鲁菌BtpA和BtpB基因缺失突变载体的构建及生物信息学分析

文献类型： 中文期刊

作者： 乔连江;张萍;周玉成;杨森;杨艳玲

作者机构：

关键词： 布鲁菌;Ⅳ分泌系统;无缝克隆技术;生信分析

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 30 卷 6 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为进一步研究布鲁菌IV分泌系统(T4SS)效应蛋白Btp A和Btp B的分子功能,本研究预构建羊布鲁菌Btp A和Btp B基因缺失突变载体,并对其生物学功能进行简单的预测。本研究以羊布鲁菌流行菌株基因组为模板,分别设计了BtpA和BtpB基因上、下游同源臂引物,通过PCR克隆技术得到了待融合基因片段。采用无缝克隆技术(in-fusion cloning),将待融合片段与线性化载体PBK-CMV-Sac B连接,经转化、阳性载体的筛选、PCR鉴定及DNA测序验证。并利用生信软件对Btp A和Btp B进行分析。结果表明:PCR鉴定和基因测序显示Btp A和Btp B上、下游基因片段均成功连接到自杀载体上；生信分析显示,Btp A和Btp B序列同源性达99%,不存在信号肽,二级结构以α-螺旋为主,具有良好的反应原性。说明本试验成功构建了羊布鲁菌Btp A和Btp B基因缺失突变载体,并对基因结构和功能进行了预测分析,为下一步研究布鲁菌的致病机制奠定了基础。

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