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不同CRISPR-Cas12f系统的编辑效率比较

文献类型： 中文期刊

作者： 黄灵芝;符晓;祁显涛;刘昌林;谢传晓;吴鹏昊;任姣姣;朱金洁

作者机构：

关键词： Cas12f;sgRNA/Cas12核糖核蛋白复合体;原生质体;编辑效率

期刊名称：作物学报

ISSN： 0496-3490

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 来自Type Ⅴ-F家族的CRISPR/Cas12f蛋白报道仅为Cas9蛋白分子的1/4到1/3大小，在病毒载体的递送上具有重要优势。然而，CRISPR/Cas12f系统介导植物基因编辑的报道较少，编辑活性相对较低，限制了该系统在植物上的进一步应用。本研究分别在体外酶切、酵母以及玉米原生质体瞬时表达3个体系中比较了OsCas12f、SpCas12f及UnCas12f的编辑活性。结果表明，基于Cas12f/sgRNA的体外酶切，OsCas12f与SpCas12f蛋白的编辑活性相当，未检测到UnCas12f对底物酶切活性；在酵母突变eGFP的恢复表达试验中，OsCas12f在2个测试位点对eGFP蛋白的表达恢复效率达到95%以上，效率与Cas12i.3相当；SpCas12f介导的2位点eGFP蛋白表达恢复效率分别是1.63%与3.20%，效果次之；UnCas12f蛋白几乎无编辑活性；玉米原生质体瞬时表达比较OsCas12f和SpCas12f介导的玉米内源位点的编辑效率，发现OsCas12f对2个位点的编辑效率分别为2.72%和1.97%，而SpCas12f仅能介导其中1个位点的定点编辑，编辑效率为1.09%。Cas12f蛋白在靶位点处引入的突变类型以碱基的缺失为主，缺失碱基长度在-9～ -17 bp之间。综上，OsCas12f可以作为植物微型基因编辑器及衍生技术开发的底盘工具酶。

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