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基于异源策略的黄曲霉毒素B_1酶联免疫(ELISA)分析方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 李敏;马飞;李培武;张奇;张文

作者机构：

关键词： 黄曲霉毒素B1;人工抗原;合成鉴定;ELISA;异源策略

期刊名称：中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2014 年 36 卷 06 期

页码： 802-807

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为提高黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)酶联免疫分析灵敏度,建立了基于异源策略的间接竞争酶联免疫分析(IC-ELISA)方法。首先采用黄曲霉毒素B1与羟基乙酸(glycolic acid,GA)进行衍生化反应,生成缩醛(AFB2-GA),即AFB1半抗原,质谱鉴定结果为ESI-MS:388.07[M+H]+,表明半抗原合成成功。然后采用活泼酯法,将AFB1半抗原羧基与牛血清白蛋白(BSA)的氨基经脱水反应实现化学共价偶联,得到AFB1人工抗原AFB2-GA-BSA。紫外扫描结果表明人工抗原AFB1特征吸收峰与BSA和AFB1的特征吸收峰有明显差异,BSA与黄曲霉毒素B1成功偶联,摩尔结合比分别为8.45∶1。最后将黄曲霉毒素B1人工抗原AFB2-GA-BSA作为包被原,利用黄曲霉毒素B1高特异性3G1抗体,建立了基于异源策略的IC-ELISA方法。利用该方法测定了3G1抗体的灵敏度,检测灵敏度达到0.3ng/m L,比同源ELISA方法检测灵敏度(1.6ng/m L)提高了81.25%,并将方法应用于花生中黄曲霉毒素的实际检测。测定结果与高效液相色谱法结果进行比对,结果符合曲线y=1.044 4x+0.090 2,R2=0.975 1,说明该方法能满足花生中黄曲霉毒素快速筛查的测定准确度的要求。

分类号： S859.81

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