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递呈副猪嗜血杆菌保护性抗原的重组大肠杆菌 菌影疫苗对小鼠的免疫保护效果评价

文献类型： 中文期刊

关键词： 副猪嗜血杆菌;;菌影疫苗;;递送系统;;小鼠免疫效力评价

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为了评价递呈副猪嗜血杆菌（G. parasuis，GPS）主要保护性抗原蛋白的重组大肠杆菌菌影疫苗（以下简称 菌影疫苗）对小鼠的免疫保护效果，本研究分别构建能够表达GPS细胞致死膨胀毒素（CDT、rCdtB、rAfuA、rOppA）与裂 解蛋白E的重组大肠杆菌。对重组大肠杆菌进行裂解测试并通过免疫电镜观察目的蛋白在菌影中的定位情况后，通过 western blot检测各蛋白的表达及含量。根据各蛋白的表达量将各重组大肠杆菌菌影与佐剂ISA 201 VG乳化后制备菌影 疫苗，使疫苗中各蛋白（rCdtB、rAfuA、rOppA）的浓度均为20 μg/300 μL。将本实验室前期纯化的重组蛋白rAfuA、 rCdtB、rOPPA与佐剂ISA 201 VG乳化后制备亚单位疫苗，疫苗中的各蛋白浓度均为20 μg/300 μL。将80只6周龄 BALB/c小鼠随机均分成4组（A组、B组、C组与D组），其中A组、B组、C组与D组分别为PBS对照组、GPS亚单位疫 苗免疫组和表达各CDT及裂解液蛋白E的菌影疫苗免疫组。A、B、C组小鼠均采用背部皮下多点注射方式免疫，D组采 用皮下多点注射+口服途径免疫首免后间隔14 d二免；。所有小鼠均于一免后14 d与28 d分别通过颌下采血，通过间接 ELISA 方法检测各组小鼠血清中各蛋白的特异性抗体水平，以及二免后14 d IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌水平。结果显 示，二免后14 d，B组、C组和D组小鼠血清中rAfuA、rCdtB和rOppA抗体水平与A组和免疫前相比均极显著升高 （P<0.0001），其中C组与B组小鼠血清中这3种蛋白的抗体水平均无显著差异。二免后14 d，将A、B、C、D组小鼠均 随机分为2组（每组10 只），分别经腹腔注射GPS 5 型HN10 株菌液（7×108 cfu/只）与GPS 13 型ZD12 株菌液（3.5×108 cfu/ 只），进行攻毒保护试验。结果显示，C组疫苗对HN10株和ZD12株攻毒小鼠的免疫保护率均为80%，D组疫苗对HN10 株和ZD12株攻毒小鼠的免疫保护率分别为70%和80%，B组疫苗对HN10株和ZD12株攻毒小鼠的免疫保护率分别为 70%和90%，C、D组菌影疫苗对小鼠的免疫保护率均极显著高于A组（P<0.001），与B组亚单位疫苗的保护率无显著差 异。以上结果表明，本研究制备的菌影疫苗对GPS 5型和GPS 13型菌株攻毒小鼠均能够提供良好的免疫保护效力，与 相同剂量亚单位疫苗无明显差异，本研究为开发新型亚单位疫苗提供了新的思路和实验参考。

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