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基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp1基因敲入小鼠

文献类型： 中文期刊

作者： 沙芳芳;范沛;杨培长;张璐;李建科

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;小鼠;敲入;蜂王浆主蛋白1;血压

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： [目的]探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1 （MRJP1）基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。[方法]利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵,制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp1基因定点敲入小鼠,并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵,持续将血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导野生型（WT）和纯合子(Mrjp1+/+)小鼠,比较不同时间收缩压和舒张压,以及胸主动脉中膜面积/管腔面积（Media/Lumen area）比值的差异。[结果]F0代嵌合体小鼠与野生型交配,产生杂合子(Mrjp1+/-)小鼠,对Mrjp1+/-小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示,Mrjp1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp1+/-小鼠之间交配产生WT、Mrjp1+/-和Mrjp1+/+小鼠,Mrjp1基因在胸主动脉中能够顺利转录和翻译。持续给予AngⅡ,Mrjp1+/+小鼠收缩压和舒张压升高趋势整体低于WT小鼠,收缩压在第3、6、9、12天差异显著（P＜0.05）,舒张压在第3（P＜0.05）、6（P＜0.01）天差异显著;经AngⅡ刺激后,Mrjp1+/+小鼠胸主动脉Media/Lumen area比值亦显著低于WT小鼠（P＜0.05）。[结论]Mrjp1基因特异性敲入小鼠血管平滑肌细胞,可在体内水平上抑制AngⅡ诱导的高血压,为深入了解MRJP1蛋白功能及精准开发蜂王浆提供了重要的理论依据。

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