文献类型： 中文期刊

作者： 杨宏福

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期刊名称：中国蔬菜

ISSN： 1000-6364

年卷期： 1983 年 1 卷 04 期

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摘要： 在测定还原型维生素C时,一些含花青素的蔬菜,如萝卜、茄子、莴苣、绿菜花的某些品种,由于酸提取液呈红色,无法应用常规的2,6-二氯酚靛酚滴定法。有色提取液中维生素C的测定,可用电位滴定法、萃取比色法或汞测法。萃取比色法[1][2]不需要特殊设备,操作比较简单。这里拟定的二甲苯萃取比色法,经反复试验表明,测定结果与滴定法基本一致,方法的准确性和重现性较好。 一、原理 向一定量提取液加入过量的2,6-二氯酚靛酚染料溶液,与维生素C作用后,多余的染料用二甲苯萃取,比色。待测液中维生素C的含量与二甲苯萃取液的颜色呈线性负相关,即待测液中维生素C含量越多,未被还原的染料就越少,二甲苯苹取液的颜色也就越浅。由于水溶性的花青素不溶于二甲苯,因而不影响测定结果。 二、试剂 问)1%草酸:称取10克草酸溶于水中,稀释至1000毫升。 (2) 2%草酸:称取20克草酸溶于水中,稀释至 1000毫升。 (3) 30%硫酸锌:称取30克硫酸锌溶于水中,稀释至100毫升。 (4) 15%亚铁氰化钾:称取15克亚铁氰化钾溶于水中,稀释至100毫升。 (5)染料溶液:称取100毫克2,6一M&｛酚靛酸钠和82毫克碳酸氢钠溶于约60毫升热水中,通过滤纸过滤入100毫升容量瓶内,井用水洗涤数次,冷却后定容至刻度,倒入棕色试剂瓶,存放于冰箱。使用时吸出25毫升用水稀释至]00毫升,此溶液1毫升约相当于0.1毫克维生素C。 (6)维生素C标准溶液:精确称取100毫克分析纯抗坏血酸,溶于1%草酸,定容至100毫升,再从中吸收5毫升,用1%草酸稀释至100毫升,稀释后每毫升含维生素C 0.05毫克。标准溶液在使用前临时配制。 (7)二甲苯:分析纯。本法使用过的二甲苯可用20%氢氧钠中和后,蒸馏回收。 三、操作步骤 1.标准曲线:取50毫升具磨口塞三角瓶6个,分别吸入维生素C标准溶液0,1,2,2.5,3,4毫升,用1%草酸补充至4毫升。各瓶维生素C的含量相应为0,0.050.10,0.125,0.20毫克。各加入染料溶液2毫升,随即加入二甲苯10毫升,迅速用力摇动约20秒钟,静置后M甲苯与水层分离,将上层二甲苯革取液轻轻倒入1厘米比色杯,在分光光度计波长500毫微米处测定光密度,以二甲苯空白调零。依据标准系列维生素C毫克数与相应的光密度绘制标准曲线。 2.样品提取:将新鲜蔬菜样品洗净、擦干、在玻璃板上用不锈钢刀切碎混匀,称取100克,加入100克2%草酸,用组织捣碎机高速处理1分钟,倒出匀浆,如泡沫大多,可]J02滴辛醇消除。称取一定量匀浆(2克匀浆折算为1克样品),用1%草酸洗入100毫升容量瓶,按每10克匀浆0.1毫升计算,加入30%硫酸锌和等量的15%亚铁氰化钾,以除去脂溶性色素,再用1%草酸定容至刻度,充分摇匀,然后通过快速滤纸过滤入100毫升三角瓶。 3.测定:吸取上述提取液4毫升(如维生素C含量超过0.2毫克,可吸取1—3毫升,补加1%草酸至4毫升),放入50毫升具塞三角瓶,依次迅速加入染料溶液2毫升、二甲苯10毫升,按照标准曲线的方法测定光密度。 四、结果计算 根据测定波的光密度查标准曲线,求出相应的维生素C毫克数,然后按下式计算样品中维生素C的含量,以每百克鲜样含维生素C的毫克数(mg八00gFW)表示: L,,*,—_。。C·Vt 维生素C含量一。二一\’j”一X 100 。。。。v。。 W·Vin 式中,C为测定液中维生素C的含量 (毫克)ZVt为提取液总体积(毫升)IW为样品重(克);Vin为分取测定液体积 (毫升)。 五、准确性和重现性 为了检验比色测定法的准确性与重现性,采用不含花青素的蔬菜样品,对同一份提取液用常规染料滴定法和苹取比色法进行测定,结果列于表1、表2。 表1是两次测定的平均值,可以看出,几种含量不同的蔬菜作品满定法和比色法D;J测定值都相当接近,俄和。方法的绝对偏差范围为每百克鲜重0.1—1.6毫克,以滴定法为标准,比色法的相对偏差范围为0.2一o.3%。基本上符合分析要求。表2是同一提取液的5次测定值,表明两种方法都具有较好的重现性,5次测定值的变动系数在1.6%以下。由此认为,应用二甲苯革取比色法测定有色提取液中的维生素C,结果是可靠的。 在方法比较试验中,发现个别样品比色法的测定值偏差较大,究其原因主要.是: 《1)提取液中混有脂溶性色素(叶绿素、胡萝h素类等),苹取时溶于二甲苯,造成负的误差。在样品提取时加入白陶土或硫酸锌和亚铁氰化钾溶液,可以除去这类色素,后者的脱色效果优于白陶土,掌握适当的用 回月回量。不影响测定结果。(2)二甲苯革取液染料颜色的稳定性与颜色的深浅有关,光密度值在0。3以下,可保持数小时不退色,、而颜色深的就较不稳定,苹取后应在半小时内比色完毕,否则会产生正的误差。(3)测定波中作用后多余的染料革取不完全,也会出现正误差。 比色法的重现性在很大程度上取决于标准曲线的稳定性。本法测定的标准曲线,如以维生素C的毫克数(Y)对光密度(X)计算相关系数与回归方程 Y=a—bX,其稳定性表现在:(1)负相关系数等于或接近于1;(2)回归截距(a)等于或接近于2毫升染料所相当的维生素C毫克数(用滴定法标定);( 3)每次测定的回归系数(b)变动较小。表8、表4列举1982年4、5月间测定的三次标准曲线的光密度值及相应的计算数据。 可以看出。三次不同时间测定的标准曲线,。负相关系数都在0.99以上,回归截距与2毫升染料标定值的最大相对偏差小于3%,回归系数之间经统计分析无显著差异,说明标准曲线的稳定性较好,这就进一步验证了革取比色法的可靠性。 在实际工作中,如果所测标准曲线负相关系数低于0.99,回归截距与2毫升染料标定值偏差大于5%,这可能是由于分光光度计性能不稳定或操作方法失误造成的,就应查明原因,重新测定。溶于M甲苯的’2,6一二氯酚靛酚吸收光谱为一单峰曲线,宜选择最大吸收波长进行比色。使用新配制的或存放一周以上的染料溶液,一般要重测标准曲线维生素C的比色测定@杨宏福$中国农科院蔬菜所1.A.И.耶尔马科夫等:植物生物化学研究法,1956年,科学出版社,91-92。 2.S. Rangana: Manual of Analysisof Fruit and Vegetable Products,1977, 96-99。

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