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布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体的构建及在293T细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 乔连江;杨森;张萍;杨艳玲

作者机构：

关键词： 布鲁氏菌 ; BtpA和BtpB基因 ; 真核表达 ; 293T细胞

期刊名称：动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2021 年 42.0 卷 7.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为了构建布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体,便于深入研究其在布鲁氏菌逃逸宿主免疫机制中发挥的作用.根据GenBank公布的布鲁氏菌16M BtpA和BtpB序列设计了特异性引物,并提取布鲁氏菌16M总RNA,将其逆转录成cDNA为模板,进行了PCR扩增,获得BtpA和BtpB目的片段,连接至pMD18-T进行克隆纯化,再与pcDNA3.1载体进行连接,经PCR、酶切和测序分析等方法鉴定后,利用LipofectamineTM2000脂质体转染至293T细胞,Western blot检测BtpA和BtpB蛋白的表达.结果显示,PCR扩增出了873 bp的BtpA基因片段和924 bp的BtpB基因片段,依次连至克隆载体pMD18-T和真核表达载体pcDNA3.1,经限制酶EcoRⅠ和XbaⅠ酶切验证正确,测序分析显示与GenBank公布的序列信息完全一致;Western blot检测结果显示,pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA分别在32 ku和35 ku处出现了条带,与预期结果完全相符,说明能在293T细胞中表达.成功构建了pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA真核表达载体,并证实了其能在293T细胞中表达,为后续研究其作用与机制提供了材料.

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  • 相关文献

[1]外源蛋白表达系统及其应用的研究进展. 李航,戚睿斌,陈宗艳,刘光清,李传峰. 2021

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