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微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 杨晓娇;周鹏;米荣升;黄燕;石凯;王晓娟;王向佩;刘宇轩;雷晓思;陈兆国

作者机构：

关键词： 微小隐孢子虫;类钙调蛋白基因;克隆;原核表达

期刊名称：动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2015 年 01 期

页码： 26-30

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。

分类号： S852.723

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