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陆地棉转录因子GhWRKY91基因的原核表达及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 顾丽姣;魏恒玲;喻树迅

作者机构：

关键词： 棉花;GhWRKY91基因;SDS-PAGE;原核表达;表达分析

期刊名称：安徽农业大学学报

ISSN： 1672-352X

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了筛选出高表达棉花GhWRKY91可溶性蛋白的原核表达载体。以中棉所10号叶片的c DNA为模板PCR扩增GhWRKY91基因，扩增产物分别构建到4个不同的原核表达载体pET-22b（+）、pET-32a（+）、p MAL-c5x和pGEX-4T-1。将重组载体pET-22b（+）-GhWRKY91、 pET-32a（+）-GhWRKY91、 pMAL-c5x-GhWRKY91和pGEX-4T-1-GhWRKY91转化到大肠杆菌菌株BL21（DE3）或Arctic-ExpressTM（DE3）RP中，IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳分析不同原核表达载体的蛋白表达情况。结果显示，pET-22b（+）-GhWRKY91和pET-32a（+）-GhWRKY91在BL21（DE3）中以及pMAL-c5x-GhWRKY91在Arctic-ExpressTM（DE3）RP中均未见明显蛋白表达，而pGEX-4T-1-GhWRKY91在Arctic-ExpressTM（DE3）RP中表达的蛋白基本存在于上清中，可获得可溶性蛋白。因此，将GhWRKY91基因构建到pGEX-4T-1原核表达载体上可成功获得可溶性蛋白。

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