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D型流感病毒NP蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 肖雨晴;程娇娇;孙锐瑶;陈妍希;谯薇美;尹鑫;远立国;李守军;卢刚

作者机构：

关键词： D型流感病毒;NP蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2023 年 43 卷 10 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 该研究旨在对D型流感病毒(influenza D virus,IDV)NP蛋白进行原核表达并制备多克隆抗体,为D型流感快速诊断技术奠定基础。采用PCR技术扩增D/bovine/Mississippi/c00046N/2014毒株的NP片段编码区,并对其序列进行跨膜区、信号肽、疏水键、抗原性及结构域分析,筛选出最优区段以制备多克隆抗体。该研究将IDV NP最优编码区序列插入原核表达载体pET-B2M,构建pET-B2M-NP重组阳性质粒,经PCR和测序鉴定后将重组阳性质粒转化至大肠杆菌TreliefTM5α中；IPTG诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化重组NP蛋白,并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。序列分析结果显示,1~500氨基酸区段无跨膜区和信号肽序列,局部亲水性好且具备良好的免疫原性,为制备重组NP蛋白的最佳抗原区段。经测序验证构建了pET-B2M-NP重组阳性质粒,转化后经IPTG诱导,主要以包涵体的形式表达了相对分子质量大小约为72 kDa的蛋白,符合预期。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶100000且免疫原性良好。Western blot和间接免疫荧光试验结果均表明,所制备的NP多克隆抗体能高效地与IDV发生特异性结合。该研究通过原核表达系统表达了IDV重组NP蛋白,制备了免疫原性和特异性良好的兔抗NP多克隆抗体,为研究NP蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示IDV致病机制奠定了基础。

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