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分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2重组枯草芽孢杆菌的构建与抗体检测

文献类型： 中文期刊

作者： 邓瑞鹏;龚海燕;兰卓;陈兆国;王春仁

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;枯草芽孢杆菌;EtMIC2;分泌表达;抗体检测

期刊名称：黑龙江八一农垦大学学报

ISSN： 1002-2090

年卷期： 2024 年 36 卷 06 期

页码：

收录情况： 无来源刊（2024版）

摘要： 鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病，可造成严重的经济损失。目前，应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段，但随着抗药性和环境污染等问题的出现，抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的主要病原，因此，研究旨在通过芽孢杆菌表达系统，构建能够分泌表达柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2(Eimeria tenella isolate microneme protein 2,Et MIC2)重组枯草芽孢杆菌菌株，为研发新型鸡球虫疫苗奠定基础。首先，采用PCR及质谱分析方法鉴定食用性及饲用性菌株，然后从柔嫩艾美耳球虫基因组中扩增EtMIC2基因，通过无缝克隆技术将其克隆至pBE2-R质粒中，构建重组质粒pBE2-R-EtMIC2，并采用冰浴转化将重组质粒分别整合至两株枯草芽孢杆菌中，最后采用PCR、SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。将重组菌株饲喂雏鸡，免疫7 d后初步检测抗体效价。结果表明：EtMIC2基因克隆成功，且成功整合于饲用性枯草芽孢杆菌基因组，目的蛋白正确表达，并分泌至胞外，将重组菌株饲喂给雏鸡后，血液中检测出EtMIC2抗体。研究成功构建了分泌表达柔嫩艾美耳球虫Et MIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌，且重组菌株能刺激动物产生抗体，可用于后续的抗球虫免疫保护性试验。

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