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鸭疫里默氏杆菌间接ELISA检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 王梦迪;钟宁远;冷楠楠;蒋蔚;余祖功;阿曼古丽·斯拉依;韩先干

作者机构：

关键词： 鸭疫里默氏杆菌;间接ELISA;优化;方法建立

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为建立一种快速准确检测鸭疫里默氏杆菌抗体且便于基层推广应用的间接ELISA方法，通过方阵滴定法优化ELISA抗原包被条件、抗原稀释浓度、血清稀释浓度以及二抗孵育时间、二抗稀释倍数等，综合评估该检测方法的敏感性、特异性等。结果显示，建立的间接ELISA检测方法抗原最佳包被浓度为109 CFU/mL、抗原最佳包被条件为37 ℃包被2 h，一抗血清最佳稀释倍数为1∶1 600，封闭液以5%脱脂乳为最佳，最佳封闭条件为37 ℃ 1 h，一抗最佳孵育条件为37 ℃ 2 h，酶标二抗最佳反应条件为37 ℃ 2 h、酶标二抗最佳稀释倍数为1∶5 000，最佳显色时间为20 min。以RA-CQ3（血清1型）为靶标抗原包被时，待检阳性血清稀释度达到1∶12 800时和以RA-NJ2（血清2型）为靶标抗原包被时，待检阳性血清稀释度达到1∶25 600时仍可用临界值判定，表明该方法具有良好的敏感性。特异性试验结果显示RA抗原不与O1型禽致病性大肠杆菌、鸭病毒性肠炎病毒（DEV）、呼肠孤病毒DRV-TH11、呼肠孤病毒DRV-Gu8、4型禽腺病毒FAdV-4、鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）阳性血清发生反应，建立的ELISA方法特异性较好。结果表明，成功建立了一种快速、敏感的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的方法，可为鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查和临床RA抗体检测提供技术支持。

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