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基于Split-GFP技术建立布鲁氏菌分泌蛋白鉴定系统

文献类型： 中文期刊

作者： 王坤鹏;尹伊;杨新梅;刘津月;李梦思;李娜;王少辉;鲍衍清;张广冻;祁晶晶;黄勇;田明星

作者机构：

关键词： Split-GFP;布鲁氏菌;分泌蛋白;鉴定

期刊名称：微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 【背景】布鲁氏菌作为一种兼性胞内寄生菌，可通过分泌效应蛋白修饰宿主细胞多重信号通路帮助其完成胞内增殖。因此，分泌效应蛋白的鉴定对于阐明布鲁氏菌致病机制至关重要。细菌分泌效应蛋白的鉴定方法通常有融合标签法和酶标记技术，但其操作步骤繁琐、成本昂贵。【目的】基于双分子荧光互补技术开发一种简单便捷的质粒系统，用来鉴定布鲁氏菌的分泌效应蛋白。【方法】本研究基于Split-GFP技术，首先，构建真核表达质粒pMAX-sfGFP1-10-IRES-NLS-tagBFP质粒，该质粒能在转染的细胞中表达sfGFP1-10蛋白片段，同时具有核定位信号的BFP蛋白能指示转染成功的细胞；之后，构建能在布鲁氏菌中融合表达4×GFP11蛋白的pMCRt-mCherry-P31-4×GFP11-Flag质粒。最后，通过布鲁氏菌分泌效应蛋白BspA和BPE123以及阴性蛋白GST验证Split-GFP系统的可行性。【结果】荧光显微镜观察转染pMAX-sfGFP1-10-IRES-NLS-tagBFP质粒的He...

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