文献类型： 中文期刊
作者： 皮一飞;宋新辉;王淅琳;李谨谨;孙长斌;徐炜
作者机构：
关键词： （1-1-1）高通量筛选;耐药性;R-loop;定点调控;CRISPR/dCas9
期刊名称：生物技术通报
ISSN： 1002-5464
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 【目的】开发哺乳动物细胞R-loop靶向编辑技术，探究其在肿瘤细胞耐药性研究中的应用。【方法】构建无酶切活性的Cas9与具有R-loop水解活性的RNase H1融合蛋白dCas9-RNaseH1表达载体，用于实现对R-loop的靶向编辑。在HeLa细胞中稳定表达该融合蛋白，建立R-loop靶向编辑细胞模型。转染覆盖全基因组转录起始区域的sgRNA文库，构建R-loop筛选细胞库，筛选影响紫杉醇和顺铂耐药性的R-loop功能位点。【结果】筛选获得744个影响HeLa细胞耐药性的R-loop功能位点，覆盖了细胞周期、凋亡、信号传导等关键生物通路。其中，26个位点使HeLa细胞对这两种药物产生耐药性，8个位点使其对这两种药物敏感，提示可能存在共享的生物通路。功能验证显示，部分R-loop功能位点通过调节相关基因（如ZBTB20、SPON2、ACTRT1等）的表达来影响HeLa细胞对抗肿瘤药物的敏感性。【结论】成功开发出适用于哺乳动物细胞的R-loop靶向编辑系统，并建立高通量筛选平台。
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