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大肠杆菌-沙门氏菌穿梭型BAC载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 李琳;何可缘;陈磊;姚晓慧;李宗杰;刘珂;邵东华;邱亚峰;魏建超;马志永;李蓓蓓

作者机构：

关键词： 细菌人工染色体;大肠杆菌;沙门氏菌;大片段DNA克隆;基因簇

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究通过对细菌人工染色体（BAC）pBeloBac11的定向改造，构建了克隆大片段DNA的大肠杆菌-沙门氏菌穿梭型BAC载体pBACt3a。通过移除pBeloBac11质粒的氯霉素抗性基因cat，并引入pSC101复制子与营养缺陷型筛选标记asd基因，获得了在大肠杆菌和沙门氏菌中均可在无抗生素压力下，保持稳定遗传的穿梭BAC质粒。同时，基于Red同源重组方法，构建了asd基因缺失型大肠杆菌DH10B △asd，以适配于pBACt3a质粒的扩增及遗传操作。荧光定量PCR分析表明，pBACt3a在大肠杆菌中的拷贝数约为pBeloBac11的2-3倍，表明其依旧保持低拷贝的特性。基于以上获取的载体和配套菌株，成功构建携带猪链球菌2型荚膜多糖合成基因簇（17.7kb）的质粒pBACtaE-S，并证实该质粒可稳定存在于大肠杆菌和沙门氏菌。本研究构建的大肠杆菌-沙门氏菌穿梭型BAC载体及其配套菌株，为用于沙门氏菌的大片段DNA克隆提供了有力工具。

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