文献类型： 中文期刊
作者： 郭兴扬;张世龙;王奂淇;孙东波;秦彤
作者机构：
关键词： 猫杯状病毒(FCV);VP1蛋白;抗原表位区;原核表达;多克隆抗体
期刊名称：中国畜牧兽医
ISSN： 1671-7236
年卷期： 2026 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 【目的】建立猫杯状病毒（Feline calicivirus，FCV）衣壳蛋白VP1主要抗原表位区（C～F）的原核表达系统，并制备其特异性多克隆抗体。【方法】通过同源重组技术将FCV VP1蛋白的主要抗原表位区克隆至原核表达载体pCold-TF中，构建重组质粒pCold-TF-FCV-VP1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达重组蛋白。利用镍柱亲和层析对表达蛋白进行纯化，并通过SDS-PAGE与Western blotting检测蛋白纯度及免疫反应性。采用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。用间接ELISA检测多克隆抗体效价，用Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）检测抗体特异性和反应性。【结果】成功构建了pCold-TF-FCV-VP1重组质粒，在16 ℃、0.5 mmol/L IPTG条件下诱导20 h蛋白表达量较高。表达的重组蛋白分子质量为82 ku，并以可溶性形式存在。间接ELISA结果显示，多克隆抗体效价可达1∶256 000，进一步通过Western blotting和IFA试验验证所制备的兔源多克隆抗体，其能特异性识别VP1蛋白，显示出良好的免疫原性与特异性。【结论】本研究成功制备了FCV VP1蛋白主要抗原表位（C～F）区的多克隆抗体，为后续深入探究FCV VP1蛋白的生物学功能，以及开发针对FCV诊断方法提供生物材料与理论依据。
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