文献类型： 中文期刊
作者： 李雪琪;张素杰;于曼;黄金光;周焕斌
作者机构：
关键词： 水稻;基因组编辑;CRISPR;CasX
期刊名称：生物技术通报
ISSN： 1002-5464
年卷期： 2023 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： Cas蛋白作为核酸酶发挥其切割活性需要识别特定的PAM序列，如SpCas9识别NGG PAM位点，LbCas12a识别TTTV PAM。已挖掘到新的能够识别TTCN PAM序列的蛋白—CasX蛋白，扩展了基因组编辑技术的编辑范围。本研究利用CasX的两个衍生型蛋白PlmCasX和DpbCasX，建立基于CRISPR/CasX介导的水稻基因编辑系统。通过PEG介导的水稻原生质体瞬时表达分析其编辑活性发现，PlmCasX和DpbCasX两个蛋白能够对水稻内源基因OsCPK16实现有效编辑。后通过水稻稳定遗传转化进一步验证，在TTCA PAM识别位点，DpbCasX蛋白对水稻内源基因OsCPK21的编辑效率为17.5%,PlmCasX蛋白对水稻内源基因OsCPK21的编辑效率为66.07%；在TTCG PAM识别位点，PlmCasX蛋白对OsCPK4的编辑效率为23.21%，而DpbCasX蛋白不能实现有效的基因编辑。并且基于MIDAS方法对PlmCasX蛋白的优化并不能提高其编辑活性。本研究证明了CRISPR/CasX系统在水稻中具有编辑活性，且其能识别TTCR PAM这一特性，扩大了基因编辑技术在水稻中的应用范围。
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