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基于Em-AGO2重组蛋白间接ELISA检测方法在多房棘球蚴病早期感染中的应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张军梅;郭小腊;曹珊菱;田峥;周昱;吴易璇;张政哲;刘光亮;骆学农

作者机构：

关键词： 多房棘球蚴病;多房棘球蚴;Argonaute 2(AGO2);间接ELISA;早期诊断

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2025 年 33 卷 11 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 多房棘球蚴病（alveolar echinococcosis, AE）是由多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）的幼虫（多房棘球蚴）寄生在人或动物肝脏中所引起的一种严重人兽共患寄生虫病。本研究旨在通过原核表达技术制备多房棘球蚴Em-AGO2（Argonaute 2）重组蛋白，建立间接酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测方法，初步评价其在多房棘球蚴病（alveolar echinococcosis, AE）早期诊断中的价值。本研究选取Em-AGO2基因N端1～738 bp的片段，构建pET-28a-Em-AGO2（1～738 bp）截短重组表达载体，将其转化至大肠杆菌（Escherichia coli）表达系统，经诱导实现高效表达，并通过亲和纯化获得高纯度的Em-AGO2截短重组蛋白。Western blot结果显示，多房棘球蚴感染的小鼠（Mus musculus）血清能够特异性识别Em-AGO2截短重组蛋白，表明该重组蛋白抗原性良好。利用纯化的Em-AGO2截短重组蛋白为包被抗原，通过各步反应条件的优化，最终确定了检测条件：1μg/mL Em-AGO2截短重组蛋白经0.05 mol/L（pH 9.6）碳酸盐包被缓冲液4℃包被过夜；用5%脱脂奶粉37℃封闭1 h；待检血清（用封闭液做1∶200倍稀释） 100μL于37℃反应1 h；酶标二抗（用封闭液做1∶10000倍稀释） 100μL于37℃反应1 h；加入底物后避光显色10 min；加入终止液50μL后测定OD450值。基于Em-AGO2截短重组蛋白的间接ELISA检测体系经ROC曲线分析显示，其对多房棘球蚴感染小鼠的诊断特异性和敏感性均达100%（AUC=1.00），且与羊细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）、羊脑多头蚴（Multiceps multiceps）、羊肝片吸虫（Fasciola hepatica）、羊弓形虫（Toxoplasma gondii）、羊捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）及兔豆状囊尾蚴（Taenia pisiformis）等病原体的阳性血清均无交叉反应。用该方法对多房棘球蚴感染早期小鼠阳性血清检测结果显示，感染7 d时，虫体粗抗原、Em18重组蛋白和Em-AGO2截短重组蛋白的阳性检出率分别为18.75%、75%和71.88%；感染10 d时，阳性检出率分别为34.38%、90.63%和84.38%；感染15 d时，阳性检出率分别为81.25%、100%和100%；感染20 d时，阳性检出率分别为90.63%、100%和100%。本研究基于Em-AGO2截短重组蛋白开发了一种AE的间接ELISA检测方法，该方法在动物多房棘球蚴病早期诊断中展现出显著的潜力，具有重要的应用前景。

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