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猪滤泡辅助性T细胞转录因子BCL6抗血清的制备及功能验证

文献类型： 中文期刊

作者： 何惠;付钰广;李宝玉;刘光亮

作者机构：

关键词： 猪;滤泡辅助性T细胞;转录因子BCL6;抗血清

期刊名称：畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2025 年 57 卷 11 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 旨在制备猪滤泡辅助性T(Tfh)细胞转录因子B细胞淋巴瘤6(BCL6)抗血清。根据GenBank中猪BCL6开放阅读框，优化设计并合成pET30a-BCL6和pcDNA3.1-BCL6重组表达载体，将重组载体p ET30a-BCL6转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，加入IPTG诱导表达BCL6蛋白，将纯化的目的蛋白与206佐剂混合乳化后经背部皮下免疫BALB/c小鼠，经过4次免疫后收集获得抗血清。采用ELISA检测血清抗体滴度，结果显示抗体水平随着免疫次数的增加而逐步升高，抗血清稀释至1∶16 000倍仍能与原核表达的BCL6蛋白反应;采用Western blot评价抗血清与原核表达BCL6蛋白的反应性，分析结果显示制备的抗血清可与原核表达BCL6蛋白特异性结合。为进一步验证抗血清与BCL6蛋白的反应性，将重组载体pc DNA3.1-BCL6转染HEK-293T细胞，采用Western blot评价抗血清的反应性，结果显示所制备的抗血清可与真核表达的BCL6蛋白特异性结合;采用间接免疫荧光(IFA)评价抗血清的反应性，IFA结果与Western blot结果一致，显示所制备的抗血清可与真核表达的BCL6蛋白特异性结合。综上，本研究成功制备了猪BCL6抗血清，为后期制备猪BCL6单克隆抗体及研究黏膜免疫过程中Tfh细胞的相关功能奠定了基础。

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