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剑麻酵母双杂交cDNA表达文库的构建及与AhKNOX2相互作用蛋白的筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 杨子平;孙艺桓;杨倩;鹿志伟;张燕梅;李俊峰;周文钊

作者机构：

关键词： 剑麻;AhKNOX2;酵母双杂交;cDNA文库;蛋白质相互作用

期刊名称：热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2020 年 41 卷 9 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 植物KNOX(Knotted1-like homeobox)可通过蛋白质相互作用参与调控落果、纤维细胞发育、次生细胞壁发育、开花等事件.为筛选剑麻叶中与AhKNOX2相互作用的蛋白,采用SMART同源重组技术构建剑麻叶片酵母双杂交表达文库,利用AhKNOX2为诱饵筛选与之相互作用的蛋白.结果 表明:文库总容量为3.9×106 CFU,转化效率为9.15×105 CFU/μg pGADT7-Rec,插入片段大小主要分布于0.5~3.0 kb之间,重组率为92%,保存的文库细胞密度为1.35×108/mL,文库滴度为2.22×107 CFU/mL.构建的pGBKT7-AhKNOX2诱饵载体存在自激活性,5 mmol/L的3-氨基-1,2,4-三唑(3-Amino-1,2,4-triazole,3-AT)能抑制诱饵载体的自激活,通过筛选获得了16个与AhKNOX2相互作用的蛋白.本研究成功构建剑麻叶片酵母表达文库,并筛选获得与AhKNOX2相互作用的蛋白,该结果为进一步研究AhKNOX2在剑麻中的功能奠定前期基础,为培育高纤维产量的剑麻新品种提供基因资源和理论基础.

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