数字农科院2.0

胚胎干细胞显微注射对小鼠和猪胚胎发育影响的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 董晓;冯书堂;王红军

作者机构：

关键词： 胚胎干细胞;嵌合体;显微注射

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2015 年 46 卷 10 期

页码： 1784-1790

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在为小鼠和猪多能性干细胞嵌合体制作提供参考,探讨胚胎干细胞(Embryonic stem cells或Embryonic germ cells,ES/EG)显微注射及受体胚胎发育时期等对胚胎发育的影响。对小鼠ES细胞和猪EG细胞分别进行研究:(1)将小鼠ES细胞分别注入小鼠桑椹胚和囊胚,比较不同发育时期受体胚胎体外培养的发育率和孵化率,以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的发育率和孵化率。结果表明,显微注射后的桑椹胚体外培养发育率和孵化率分别为94.7%和70.2%,囊胚率分别为84.6%和80.8%,注射后桑椹胚体外培养发育率极显著高于囊胚(P<0.01),但注射后囊胚体外培养孵化率极显著高于桑椹胚(P<0.01);未注射胚胎(注射胚胎)的体外培养发育率和孵化率分别为96.6%(89.9%)和67.8%(75.2%),未注射胚胎发育率极显著高于注射胚胎(P<0.01),但注射胚胎孵化率极显著高于未注射胚胎(P<0.01)。(2)将猪EG细胞分别注入猪桑椹胚、早囊、囊胚及孵化囊胚,比较不同发育时期受体胚胎移植后妊娠率以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的孵化率,并对猪EG细胞显微注射针和固定针的规格进行了探讨。结果表明,显微注射的桑椹胚、早囊及囊胚移植后妊娠率为67%,而显微注射的孵化囊胚移植妊娠率为0,桑椹胚、早囊及囊胚移植后受体母猪妊娠率极显著高于孵化囊胚(P<0.01),由桑椹胚、早囊及囊胚注射后移植获得了两头嵌合体仔猪;显微注射和未显微注射的猪胚胎其孵化率分别为47.54%和72.97%,未注射胚胎孵化率极显著高于注射胚胎(P<0.01)。确定猪EG嵌合体制作过程中,注射针外径约为30μm,内径约为25μm;固定针外直径约为130~150μm,内径约为40μm。嵌合体制作时,胚龄宜早不宜迟,桑椹胚显微注射更易操作,而且导入的时期较早,ES/EG细胞在嵌合体组织中可以有很高的贡献率,故选择桑椹胚进行注射。在本试验条件下,显微注射对小鼠胚胎发育影响不大,对猪胚胎影响较大,说明猪胚胎显微注射条件需要进一步优化。

分类号： Q813

  • 相关文献

[1]鸡胚胎干细胞的分离、培养和鉴定. 安静,杜立新. 2003

[2]一种快速、简易鉴定甘蓝类蔬菜染色体倍性方法的研究. 袁素霞,刘玉梅,方智远,杨丽梅,庄木,张扬勇,孙培田. 2007

[3]猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素的研究. 冯书堂,董晓,刘立新,牟玉莲,况玲,陈红平,张莉,张勇,张青峰. 2004

[4]PRRSV感染性克隆的反向遗传操作：结构蛋白编码基因重叠区的分离. 余丹丹,孙志,王金勇,袁世山. 2007

[5]猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素影响研究. 冯书堂,董晓,刘立新,牟玉莲,况玲,陈红平,张莉,张勇,张青峰. 2005

[6]五指山近交猪胚胎生殖细胞(EG)嵌合体在我国移植产仔. 冯书堂,丛笑倩,刘立新,李秀兰,董晓,包林平,张莉,陈红平,牟玉莲,况玲,张青峰,姚錱. 2005

[7]逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究. 张秋婷,苗向阳,安铁洙. 2010

[8]利用锌指核酸酶(ZFN)技术介导敲除猪卵母细胞孤雌胚胎中肌肉生长抑制素基因(MSTN)的初步研究. 刘杰,高鹏飞,崔文涛,李奎. 2014

[9]猪早期胚胎显微注射方法的研究. 陶涛,冯书堂,蔡正华,常慧云,谢庆阁,吴兰欣,刘殿魁. 1993

[10]锌指核酸酶及其应用研究进展. 李万利,李文清,王明发,王二耀,曹文广. 2014

[11]显微注射构建烟粉虱的RNAi技术体系. 李如美,王少丽,张友军. 2015

[12]转基因鸡的制备方法探讨. 张红涛,苗向阳,白林,刘羞菲. 2007

[13]日本血吸虫胞蚴的体外培养和操作初探. 江艳,龚仁敏,杨艺,李小红,刘毅,朱传刚,陆珂,郑浩. 2011

[14]家兔 微注射基因胚胎自体移植和异体移植的比较试验. 常惠芸,陶涛,窦忠英,樊敬庄,潘光武,赵启祖,段小波,王自强,冯书堂,谢庆阁. 1995

[15]转基因鸡制备方法的研究进展. 成荣,李建凡,陈国宏. 2004

[16]RecA蛋白介导的转基因小鼠制备. 赵永贞,肖邦,张兴举,唐中林,崔文涛,杨述林,李奎. 2008

[17]斑马鱼转基因平台的建立. 刘丽丽,王健,王海胜,余凯敏,李国超,闫艳春. 2013

[18]哺乳动物胚胎干细胞研究进展. 邓守龙,彭涛,吕自力,王安江,王亮,曹文广. 2009

[19]幼鼠睾丸发育特点及其作为精原干细胞移植受体的研究. 秦玉圣,朱化彬,郝海生,赵学明,杜卫华,秦彤,刘岩,王栋. 2012

[20]小鼠胚胎干细胞培养、克隆、分离、传代研究. 董晓,冯书堂,郑行. 2002

作者其他论文 更多>>