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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP12蛋白的表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 张文超;虞凌雪;姜一峰;高飞;黄勤峰;李丽薇;李慧春;陈鹏飞;杨德强;刘欢;童光志;杜雅楠;周艳君

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;NSP12;原核表达;多抗

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2018 年 1 期

页码： 32-36

收录情况： 北大核心（2020版） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 本研究扩增了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Hu N4株的NSP12基因,将其克隆于pCold-Ⅰ载体中,获得重组质粒pCold-Ⅰ-NSP12,并转化于E.coli/BL21感受态细胞,在16℃条件下用1 mmol/L的IPTG诱导20 h后,用SDS-PAGE电泳检测表达产物,结果显示在大约18 kDa处出现目标蛋白。用PRRSV特异性阳性猪血清对表达蛋白进行Western blot鉴定,结果显示该蛋白可以被PRRSV阳性猪血清识别。将重组NSP12蛋白纯化后,免疫6周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体。在MARC-145细胞中,对获得的NSP12多抗血清分别进行Western blot和间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定,结果显示本研究制备的NSP12多抗血清均可与感染的MARC-145细胞的PRRSV Hu N4株以及在MARC-145细胞中特异表达的NSP12蛋白发生免疫反应。PRRSV NSP12蛋白的表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究NSP12在病毒感染过程中的作用奠定了基础。

分类号： S852.651

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