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PBD1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 郭奎;杨兴武;张鸿鑫;赵宇;郑慧华;杨明凡;陈红英

作者机构：

关键词： 猪β防御素1;克隆;表达;纯化;小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)蛋白酶

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2018 年 4 期

页码： 635-641

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 猪(Sus scrofa)β防御素1(porcineβ-defensin 1,PBD1)是一种含有3对二硫键的阳离子活性肽,具有很强的抗菌活性,因此,在养猪业可能成为一种候选抗菌药剂。本研究根据Gen Bank中发表的PBD1全基因序列(登录号:NM213838)设计并合成2对特异性引物(P1/P2和P3/P4),应用引物P1/P2和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,从猪舌组织样品总RNA中扩增包含PBD1全基因的片段(310 bp),并克隆到pMD18-T载体,命名为p MD18-T-PBD1Q。用引物P3/P4,将编码成熟蛋白的PBD1基因亚克隆到原核表达载体p ET28a-SUMO中,再转化入大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),获得重组菌株,并优化表达融合蛋白的异丙基-β-D-硫代半乳糖甘(isopropy-β-Dthiogalactoside,IPTG)浓度、诱导时间以及诱导温度。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)及Western blot显示,重组菌破碎后上清中出现1条约18.3 kD的条带,在20℃、0.7 mmol/L IPTG诱导6 h,融合蛋白SUMO-PBD1表达量最高,且以可溶性形式存在;经小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)蛋白酶切割,获得了重组PBD1蛋白(约4.3 kD)。该研究结果为进一步研发具有广谱抗菌作用的微生态制剂提供技术支持。

分类号： Q78

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