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毕赤酵母表达的嗜热蓝状菌β-葡萄糖苷酶N-糖基化修饰的作用与功能

文献类型： 中文期刊

作者： 李新新;柏映国;华晨;马锐;石鹏君;罗会颖;姚斌

作者机构：

关键词： 嗜热蓝状菌;β-葡萄糖苷酶;N-糖基化;热稳定性;催化效率

期刊名称：微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2019 年 1 期

页码： 37-47

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 科技核心（2020版）

摘要： [目的]研究N-糖基化对来源于嗜热蓝状菌β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,Bgl3A)的酶学性质影响.[方法]采用定点突变技术构建了3个去N-糖基化的突变体T44A、S228A、S299A,并分别在毕赤酵母GS115中表达纯化.[结果]与野生型Bgl3A相比,突变体S228A分泌蛋白产量极低,仅能微量检测到p NPG活性;突变体T44A和S299A的最适pH和最适温度没有改变,分别为4.0和75°C,但二者的T_m值和70°C下的热稳定性都明显优于野生型.以p NPG为底物时,突变体S299A和T44A的催化效率分别降低了14.5%和70.0%;以纤维二糖为底物时,T44A的催化效率基本不变,而S299A的催化效率提高了1.1倍.[结论]Bgl3A不同位点的N-糖基化修饰对酶的分泌和酶学性质的影响具有明显差异.其中,N226位的N-糖基化在维持酶的表达和功能方面至关重要,而去除N297位点的N-糖基化可以提高酶的热稳定性及对纤维二糖的催化效率.

分类号： Q936

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