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基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因快速验证系统的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 胡积祥;曹雅倩;朱秀梅;余超;田芳;杨凤环;陈华民;何晨阳

作者机构：

关键词： 水稻;miRNA;荧光素酶;靶基因验证;瞬时表达系统

期刊名称：生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2019 年 35 卷 10 期

页码： 57-63

摘要： 旨在建立一种准确且快速的基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因验证系统,为研究水稻miRNAs的生物学功能奠定基础.已有研究证实osa-miR169o剪切靶基因OsNF-YA4(LOC_Os03g48970.1)的mRNA,以此为参照,在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中将miR169o前体基因分别与LUC表达载体、LUC-48970和LUC-48970m3融合表达载体瞬时共表达,通过CCD活体成像和Luminometor分析了共表达后LUC活性的动态变化.利用茎环qRT-PCR对miR169o的表达水平进行分析,获得靶基因验证的适合体系.在水稻原生质体体系中,LUC活性和miR169o表达水平在原生质体转化后逐渐增高;24 h时LUC活性最高,相应miR169o表达水平上升10倍左右.综合分析,在原生质体转化后24 h-36 h为适宜检测时间段.在烟草瞬时表达体系中,农杆菌注射72 h后LUC活性最强,而miR169o的表达在48 h后即可上调20倍.因此,农杆菌注射后48 h-72 h为适宜检测时间段.本系统为水稻miRNA靶基因的验证提供了一种简便、快速,且更接近于体内真实情况的实验方法.

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