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牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 张康;张璇;闫遵祥;王磊;张凯;张景艳;罗永江;仇正英;薛欢;李建喜

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;Core蛋白;表达;多克隆抗体

期刊名称：浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2019 年 31 卷 11 期

页码： 1819-1824

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白.将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1:512000.蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性.本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础.

分类号： S858.23

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