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基于SYBR Green Ⅰ的桑树皱叶病毒qPCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 孙鑫;张健;杨磊;卢全有

作者机构：

关键词： 桑树皱叶病毒;SYBR GreenⅠ;实时荧光定量PCR(qPCR);检测;灵敏度

期刊名称：蚕业科学

ISSN： 0257-4799

年卷期： 2020 年 NULL 卷 2 期

页码： 140-145

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 根据桑树皱叶病毒(mulberry crinkle leaf virus,MCLV)cp基因的核苷酸序列,设计了3对用于实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的引物,以含有cp基因全长序列的重组质粒为模板,通过PCR和熔解曲线分析筛选出1对适合用于qPCR的特异性引物.以10倍梯度稀释的含有cp基因全长序列的重组质粒为模板,进行SYBR GreenⅠqPCR并制作标准曲线,建立了MCLV的qPCR检测方法.该方法对MCLV cp基因的检测灵敏度≥47.8个拷贝/μL.利用建立的qPCR方法对大田样品进行检测,结果显示15个样品都为MCLV感染阳性,其中病毒含量最高的样品的病毒拷贝数为5.26*10~4个拷贝/μL,最低的样品为8.36*10~2个拷贝/μL.MCLV qPCR检测体系的建立可以为培育健康桑树种苗、预防病毒病的发生提供精准保障技术,也为研究桑树不同生长时期或不同组织中病毒滴度变化奠定了基础.

分类号： S888.71

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