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猪流感病毒新型核糖体移码蛋白PA-X特有序列的原核表达、纯化及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 宫晓倩;阮宝阳;刘晓敏;张鹏;汪琪;汪秀会;周艳君;李泽君;童武;郑浩;童光志;于海

作者机构：

关键词： 猪流感病毒;PA-X特有序列;原核表达;蛋白纯化;Western blot

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2016 年 24 卷 01 期

页码： 32-37

摘要： 核糖体移码蛋白PA-X是流感病毒的一种新型蛋白,为了研究该蛋白对于猪流感病毒的生物学特性的影响,我们进行了PA-X特有序列的原核表达、蛋白纯化及其鉴定。通过RT-PCR和重叠PCR方法扩增PA-X特有序列的基因,利用基因重组技术构建原核表达载体,并进行菌液PCR和菌液测序鉴定,鉴定正确后克隆转化到BL21(DE3)中,进行蛋白表达及可溶性分析,同时用镍柱亲和层析法对其进行纯化。通过菌液PCR序列鉴定,PA-X特有序列的原核表达载体序列正确,编码框正确。转化BL21后目的蛋白表达成功,且大多数为可溶性蛋白。Western blot结果表明制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应性。

分类号： S852.65

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