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甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD基因的克隆、原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 邵敏;吴朝兴;杨丽涛;李杨瑞;邢永秀

作者机构：

关键词： 甘蔗;Klebsiella variicola DX120E;nifD基因克隆;原核表达;蛋白纯化

期刊名称：基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2015 年 34 卷 03 期

页码： 512-520

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 基于NCBI数据库中固氮菌nif D基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E为模板,通过PCR方法获得了Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF;以p ET30a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒p ET30a-nif D。将正确的重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3),在28℃培养条件下经1 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-ply-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况。结果表明,本研究克隆得到甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF为1 452 bp,编码483个氨基酸;原核诱导表达后经提纯和质谱鉴定,该蛋白等电点为5.90,分子量为53.87 k D,与预期大小一致。该蛋白在原核表达系统中以包涵体的形式成功表达。利用Ni柱亲和层析方法进一步获得了纯度较高的重组蛋白,为今后单克隆抗体的制备、蛋白质印记杂交检测(Western Bloting)等研究奠定了基础。

分类号： Q78

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