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马铃薯抗晚疫病基因RB,R3a过表达及R3a特异性识别关键结构域的确定

文献类型： 中文期刊

作者： 梁春波;陈伊里;李颖;黄三文

作者机构：

关键词： 马铃薯;晚疫病;重叠延伸PCR;结构域交换;瞬时表达

期刊名称：园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2011 年 38 卷 1 期

页码： 87-94

收录情况： CSCD

摘要： 通过将马铃薯抗晚疫病基因RB,R3a编码区克隆到具有组成型CaMV35S强启动子的双元表达载体上,结合农杆菌介导的瞬时表达,分析过表达条件下RB-AvrB,R3a-Avr3a的特异性识别情况.并利用重叠延伸PCR实现R3a与同源序列I2GA1在卷曲螺旋(CC),核酸结合位点(NBS)和富含亮氨酸重复序列(LRR)三个结构域的互换,根据过敏性反应(hypersensitive response,HR)是否被阻断分析各个结构域对特异性识别的影响,确定特异性识别的关键结构域.结果表明:CaMV35S启动子驱动的RB基因在表达量上较自身启动子有明显提高,使HR反应加快;R3a的表达量和特异性识别Avr3a诱导产生HR反应的速度在两者之间均无明显差别.另外,R3a与I2GA1在LRR区域序列发生交换后,识别Avr3a诱导产生HR反应的能力也发生了交换,即R3a特异性识别Avr3a的关键序列位于LRR结构域内

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