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运用SMART技术构建斯氏艾美耳球虫子孢子cDNA文库

文献类型： 中文期刊

作者： 乔军;孟庆玲;才学鹏;田广孚;景志忠;张艳

作者机构：

关键词： SMART;斯氏艾美耳球虫子孢子;cDNA文库

期刊名称：中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集

ISSN：

年卷期： 2006 年

页码： 1

收录情况： CSCD

摘要： 为克隆和研究斯氏艾美耳球虫子孢子入侵细胞相关蛋白基因,应用SMART(switchingmechanismat5’endofRNAtranscript)技术,构建了质量较高的子孢子全长cDNA文库。首先,将孢子化的卵囊用玻璃珠法破碎使其释放出孢子囊,加入胆酸盐处理,并过纤维素柱以纯化出子孢子。采用TrizoL,试剂提取纯化子孢子总RNA,经Oligotex试剂盒纯化得到mRNA。利用含SfiB酶切位点的CDS／3’PCR引物合成cDNA第1条链,而含SfiA酶切位点的SMART寡核苷酸作为cDNA第1条链在mRNA5’端延伸出去的模板。LD-PCR合成双链cDNA,经Sfi酶...

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