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基于高分辨率熔解曲线的烟草突变体筛选体系构建和优化

文献类型： 中文期刊

作者： 杨文武;张芳;米其利;黄海涛;李凤霞;高茜

作者机构：

关键词： 烟草;高分辨率熔解曲线;单核苷酸多态性

期刊名称：分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2024 年

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收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 高分辨率熔解曲线分析(high resolution melting curve analysis， HRM)是在实时荧光定量PCR基础上发展起来的一项鉴定碱基差异的新技术。本研究旨在构建和优化烟草EMS诱变群体中突变位点鉴定的HRM最佳体系。试验结果表明，在20 μL反应体系中Master Mix Eva Green Dye染料0.4 μL、引物浓度0.3 μmol/L、DNA模板浓度80～100 ng/μL，扩增子500 bp以下SNP分型较好。通过优化的HRM分型方法，在EMS诱变的红花大金元M2代突变体库中对烟草空泡蛋白基因AP24进行突变体筛选，共筛选到12个突变体，突变体的测序验证表明这些位点均发生了相应的点突变，突变体检出的阳性率为100%。本研究建立的烟草SNP基因分型体系适合一次试验对单位点、多个体的SNP鉴定和快速分型，在烟草EMS诱变突变基因筛选中具有较大的应用价值。

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