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利用量子点单病毒示踪技术研究水貂肠炎病毒的感染机制

文献类型： 中文期刊

作者： 董奕彤;王晓萌;岳凤娇;王淑杰;王春生

作者机构：

关键词： 水貂肠炎病毒;量子点;单病毒示踪;侵染机制

期刊名称：中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2025 年 1 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)在细胞内的感染过程,为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点.本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记,经TCID50滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾细胞(CRFK).CRFK细胞膜经DiO染色后用量子点标记的MEV进行侵染,利用活细胞工作站系统GE Dleta vision观测病毒进入细胞膜的过程;对CRFK细胞转染pEGFP-Rab5和pEGFP-Rab7载体来标记早期内体和晚期内体,当细胞感染量子点标记的MEV后观测MEV病毒粒子与早期内体和晚期内体的相互作用.为了进一步验证内体与病毒感染的关系,利用氯喹(chloroquine,CQ)和NH4C1两种内体酸性抑制剂来抑制内体的酸性环境,对加入抑制剂的感染后的细胞提取细胞内总RNA和蛋白,通过qPCR及 Western blot检测细胞内MEV的含量;MEV在胞内的转运与细胞骨架相关,为了探究MEV转运与哪种细胞骨架相关,对CRFK细胞分别转染GFP-lifeact和EGFP-MAP4质粒,经GE Dleta vision观测MEV与细胞骨架的关系.选择微管抑制剂Nocodazole和微丝抑制CytoD剂对感染MEV的CRFK细胞提取细胞内RNA及总蛋白,通过qPCR及 Western blot检测细胞内MEV的含量.活细胞成像显示MEV首先附着在细胞膜上,并通过内吞作用进入细胞;成像结果显示MEV与Rab5和Rab7在宿主细胞中共定位,用内体酸化抑制剂NH4 Cl或CQ预处理宿主细胞后,病毒感染被抑制,表明MEV感染需要内体的酸性环境;活细胞图像显示量子点(QD)-MEV沿着微管运动,使用微管抑制剂Nocodazole抑制了病毒感染,而微丝抑制剂CytoD的加入对感染没有影响.研究结果表明,MEV是通过内吞作用进入CRFK细胞膜,随后进入早期内体及晚期内体,在细胞内的转运过程依赖于微管.

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