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重组犬干扰素-α3抗病毒活性分析及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张东亮;刘方圆;张海玲;张蕾;廉士珍;李双双;闫如勋;李伟;汪玉彬;徐凤宇

作者机构：

关键词： 犬干扰素-α3;酵母表达;抗病毒活性分析;血清药物浓度;安全性实验

期刊名称：病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2026 年 42 卷 01 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 目的 干扰素具有广谱抗病毒活性，在临床上具有重要应用价值，开发犬长效干扰素是当前宠物抗病毒药物研究的重点。方法 本研究将犬IFN-α3成熟肽基因通过密码子优化后，构建到pPICZα A酵母表达载体上，上、下游分别引入Eco RⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点，阳性质粒经SacⅠ限制酶线性化后，电转化X33酵母菌感受态细胞，在含有100 mg/mL Zecoin抗性YPD培养基上挑取规则菌落，经AXO1鉴定引物PCR鉴定为阳性，阳性菌株经甲醇诱导表达，SDS-PAGE表明犬IFN-α3成功在酵母中分泌表达，表达产物大小为20～25 kDa，表达量0.95 mg/mL。应用微量细胞病变抑制法测定发酵原液及纯化rCaIFN-α3在MDCK上对VSV-GFP的抗病毒活性，发酵原液活性为8×10～6 IU/mL，纯化产物活性为2×10～8 IU/mg。在F81上对CPV、RDPV、MEV复制均有抑制作用，抑制效果无显著差异（P>0.05）。结果 根据标准曲线计算血清中rCaIFN-α3血药浓度，在注射后40 h达到药物浓度峰值，为458.733 pg/mL，随后浓度缓慢下降。注射rCaIFN-α剂量4×10～5 IU/kg、4×10～6 IU/kg、4×10～7 IU/kg，对体温、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数量没有影响，主要组织HE染色无明显病理变化。与辅助治疗组和RDPV对照组相比，4×10～5 IU/kg剂量注射rCaIFN-α3预防用药联合辅助治疗组和rCaIFN-α3联合辅助治疗组显著降低不同时间貉粪便中病毒载量，其中预防用药组效果最好，有效率80%，死亡率20%。结论综上所述，本研究建立了高效表达r CaIFN-α3的毕赤酵母表达系统，表达产物具有显著的抗病毒活性和良好的安全性，为开发长效重组犬IFN-α抗病毒制剂奠定了基础。

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