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基于Box-Behnken响应面法的烤后烟叶品种分子鉴定技术构建

文献类型： 中文期刊

作者： 田震;李媛;毛静静;任民;熊党安;张兴伟;殷瑜东;李少鹏;刘国祥

作者机构：

关键词： 烤后烟叶;基因组DNA提取方法;响应面分析法;SSR;KASP;分子鉴定技术

期刊名称：中国烟草科学

ISSN： 1007-5119

年卷期： 2025 年 3 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为解决烤后烟叶DNA降解严重、难以满足后续分子鉴定要求的问题,综合考虑分子标记所需DNA的浓度、质量以及提取效率、成本和安全等因素,本文基于SLS法,以加样量、离心时间、水浴时间为处理,以DNA浓度和A260/A280为响应值,采用单因素试验及Box-Behnken响应面模型确定烤后烟叶基因组DNA的最佳提取方法.结果表明,烤后烟叶基因组 DNA提取的最佳条件为加样量 20 mg、离心时间 10 min、水浴时间 15 min,按照该方法提取的 DNA浓度为588.16±27.09 ng/µL、A260/A280 为 1.75±0.03,与Design Expert 11软件预测结果相近,优化方法可靠.分子标记适用性检测结果表明,与优化前相比,以优化后SLS方法提取的DNA为模板,分别利用SSR、KASP引物进行PCR扩增后,毛细管电泳的目标片段出峰更明显,且KASP标记检测可得到明显的分型图,可用于不同品种烤后烟叶的SSR和KASP分子标记检测.优化后的SLS法及筛选出的 13对SSR引物构建的烤后烟叶分子鉴定技术体系,可将供试的烤后烟叶品种进行有效区分,适用于烤后烟叶的品种鉴定.

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