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梨火疫病菌的RPA快速检测技术的研发

文献类型： 中文期刊

作者： 蒲姝旸;张瑾逸;暴晓阳;孟青青;田茜;蔡璐璐;赵文军

作者机构：

关键词： 梨火疫病;快速检测;重组酶聚合酶扩增(RPA);实时荧光型RPA;侧流层析试纸条型RPA

期刊名称：植物保护

ISSN： 0529-1542

年卷期： 2024 年 50 卷 04 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 梨火疫病菌Erwinia amylovora是我国进境植物检疫性有害生物，主要侵染梨、苹果、山楂、海棠等多种蔷薇科植物引起梨火疫病。该病自1780年在美国被发现以来，已经传播到世界多个国家，对我国的果树生产也构成一定的威胁。严格植物检疫是全球防控梨火疫病菌扩散危害的重要方法之一，目前我国植物检疫部门主要从实验室分离鉴定、分子检测和田间症状识别及快速检测方面开展工作。本研究基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术和E.amylovora 16S-23S ITS区间的保守序列设计的引物和探针，建立了实时荧光RPA和侧流层析试纸条RPA两种检测方法。经测试，在39℃条件下，这两种检测方法都具有良好的特异性，分别能在20 min和10 min内完成扩增。实时荧光RPA对E.amylovora菌株DNA的检测阈值为1.38×10-2 ng/μL;侧流层析试纸条RPA对E.amylovora菌悬液和DNA的检测阈值分别为10～4 cfu/mL和1.38×10-3 ng/μL。侧流层析试纸条RPA体系因反应快速、读取结果方便、不需要复杂仪器操作可以满足现场快速检测的需求。

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